A1. REGISTRO DE INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS EN CÓRDOBA- REPÚBLICA ARGENTINA (SUBREGISTRO DEL REGISTRO NACIONAL)

Miño MO, Orellana J, Lozano A, Garip E, Serra MT, Sancho M, Sala Heinzmann A, Misakian S, Gambarte F, Skrie V.

Comité de Alergia e Inmunología. Sociedad Argentina de Pediatría. Filial Córdoba, Argentina

Objetivo: Conocer incidencia y prevalencia de las inmunodeficiencias primarias en Córdoba y su zona de influencia que permita racionalizar los diagnósticos y tratamientos

Material y método: se fundó el registro provincial de Inmunodeficiencias primarias, subregistro del Nacional, se estableció un grupo de estudio permanente de estas patologías, se realizaron campañas de información científica para médicos y para pacientes. Se utilizó para el registro la misma ficha que para el registro nacional y se creó una base de datos para el análisis de las variables de los distintos casos.

Resultados: Se muestran los casos registrados desde octubre de 2001 a junio de 2003. Se registraron 47 pacientes, 60% presentaban un déficit de la inmunidad humoral, 28% con fallas de la inmunidad celular y combinada, falla del complemento 6% y 6% de los pacientes con falla de la fagocitosis. Treinta y cuatro (72%) procedían de Córdoba, Capital. El centro de asistencia de los pacientes fue 49% del Hospital de Niños e Infantil Municipal, 45% en centros universitarios (Hospital Nacional de Clínicas – UNC y Clínica Universitaria Reina Fabiola – UCCOR). Los déficit humorales el 64% eran de sexo femenino y 19/28 se lo diagnosticaron entre los 4 y 12 años, en los déficit celulares y combinados el 61% son varones y 7/13 fallecieron entre los 6 meses y el año de edad. En los déficit de fagocitocis se registro un caso de enfermedad granulomatosa crónica y dos casos de Chediak Higashi donde existía consaguinidad. Los tres casos de falla del complemento fueron angioedema hereditario.

Conclusiones: La incidencia de las inmunodeficiencias primarias es baja, el registro como trabajo multicéntrico, permite la adquisición de la experiencia tanto en la metodología diagnóstica como terapéutica a llevar a cabo en este grupo especial de pacientes.


A2. COMPARISON OF CLINICAL FEATURES BETWEEN RECURRENT INFECTIONS PATIENTS´ WITH AND WITHOUT PRIMARY IMMUNODEFICIENCY

Tavares F S, MD1 ;Costa-Carvalho B T, MD1 ;Nudelman V, MD21

Division of Allergy, Clinical Immunology and Rheumatology of the Department of Pediatrics Federal University of São Paulo, and 2Clinical Pathology Laboratory of the Israelita Albert Einstein Hospital, São Paulo, Brazil

Objectives: Assessment of clinical characteristics of patients, with or without PID, presenting with recurrent infections and the most useful diagnostic procedures for their identification.

Patients and Methods: Two hundred and fifty eight patients were assessed, 132 (51%) with PID and 126 (49%) without PID. The clinical characteristics focused on were as follows: presence of atopy, nutritional analysis and most common infections. Laboratory investigations included full blood cell count, serum immunoglobulin levels and a more in-depth investigation depending on necessity.

Results: At first consultation nutritional status of all patients was similar. Mean age at first consultation in the outpatient department was 7 years and 7 months for the PID patients and 4 years and 10 months for the NPID (p<0.001). The majority of patients (74%) were referred by pediatricians and allergists. Airway infections were the most frequent allergic manifestations in both groups. Comparing the mean of infection between the groups we found a significant difference in the number of otitis, sinusitis and septicemia, which was higher in the PID group. However, the mean number of pneumonia, meningitis, hospitalizations and intensive care therapy was similar in both groups. Of the 132 patients with PID, 70 (53%) had a probable diagnosis after blood cell count and immunoglobulin levels were performed.

Conclusions: The clinical differences between patients, with and without PID, with recurrent infections are minimal. Blood cell count and serum immunoglobulin levels were the major contributing lab tests in diagnoses of PID.


A3. ESTUDIO DE PACIENTES DERIVADOS POR INFECCIONES A REPETICION A UN POLICLÍNICO DE INMUNOLOGÍA

M. Vivanco, F Cofré, A Cruzat, C Navarrete

Servicio de Pediatría, Hospital Roberto del Río, Santiago de Chile

Introducción: Las inmunodeficiencias (ID) son enfermedades poco frecuentes en pediatría y existe subdiagnóstico. Se manifiestan por la predisposición a presentar infecciones recurrentes, atípicas o de difícil manejo. Por este motivo se estudian pacientes derivados al policlínico de inmunología con este diagnóstico.

Materiales y Métodos: Se realiza un estudio descriptivo mediante la revisión de fichas de pacientes derivados por infecciones recurrentes al policlínico de inmunología del Hospital Roberto del Río entre los años 1990 y 2003.

Resultados: Se revisan 219 fichas, 17 pacientes se pierden. Todos los pacientes estudiados presentan un puntaje de Hoskin mayor de 20 puntos, excepto 18 pacientes menores de 6 meses. Entre los estudiados, 61.4% son hombres y 38.6% mujeres, edad promedio de derivación fue de 36,8 meses con un rango de 1 mes a 180 meses. Un 49% de los pacientes es derivado entre el año 2002 y 2003. Los diagnósticos encontrados fueron: 13.4% inmunodeficientes, 2% posiblemente inmunodeficientes, 19.8% sin alteración inmunitaria y sin persistencia de infección, 4% tienen exámenes alterados y recuperados posteriormente o piodermitis recurrentes, 33.7% presenta sólo atopia, 20.3 % infecciones secundarias a otras patologías, 3% pendientes. Las ID diagnosticadas fueron: 37% déficit de IgA, 22.2% déficit anticuerpos específicos, 11.1% hipogamaglobulinemia común variable y déficit de subclases y 3.7% de déficit de complemento, agamaglobulinemia, IFNGR1 parcial y enfermedad granulomatosa crónica. Entre los ID 44.4% presentó atopia.

Discusión: De los estudiados un 13.4% corresponde a ID. La concomitancia de atopia e ID explica su alta frecuencia entre los ID. En el grupo de los ID, la principal patología encontrada es el déficit de IgA; le sigue el déficit de anticuerpos específicos, diagnóstico que sólo ha sido posible realizar en los últimos años.


A4. DISTRIBUTION OF PRIMARY IMMUNODEFICIENCY DISEASES DIAGNOSED IN A PEDIATRIC ALLERGY & IMMUNOLOGY CLINIC.

Porto A; Porto Donida M; Annes RD; Wolff NMM; Porto MD.

Sao Vicente de Paulo University Hospital – Passo Fundo, RS. Brazil

Advances in immunologic techniques in recent years have led to increase recognition of primary immunodeficiency disorders (PID), with IgA deficiency had had reported by most registries with the most common phenotype. There have also been reports of increased associated of autoimmunity, allergy, and other diseases.

We wished to determine the percentage of different primary immunodeficiency disorders seen in a private pediatric Allergy & Immunology clinic.

We performed a retrospective review of the patients referred to our allergy & immunology clinic for immunologic evaluation of recurrent infections or allergies disease between 1990-2004.

Of the 53 patients with primary immunodeficiency diseases evaluated, the majority had predominantly antibody deficiencies (70%). The most common phenotype was specific antibody deficiency with normal immunoglobulins (20%) defined as inability to mount an adequate response to pneumococcal polysaccharides followed by IgA deficiency (16%).

Associated diseases found in 38,1% of patients were mostly allergic conditions.

This retrospective study reveal that specific antibody deficiency with normal immunoglobulins followed by IgA deficiency was the most frequently diagnosed primary immunodeficiency disorders in our patient population. It also indicates that immunodeficiency disorders should be considered in patients with severe allergic disease that present with recurrent infections.


A5. ARE PRIMARY IMMUNODEFICIENCIES RARE? A FOUR-YEAR EXPERIENCE OF A REFERENCE CENTER FOR IMMUNOLOGICAL INVESTIGATION.

Dewton de Moraes Vasconcelos, MD, PhD; Anete Sevciovic Grumach, MD, PhD; Fábio Fernandes de Carvalho Jr, MD, MSc; Alexandre de Almeida, MD, MSc; Kélem De Nardi Chagas, MD; Maurício Domingues Ferreira, MD; Noac Chuffi Barros, MD; Alberto José da Silva Duarte, MD, PhD.

Primary Immunodeficiencies Outpatient Unit (ADEE-3003), Department of Dermatology, University of São Paulo Medical School, Sao Paulo, Brazil.

Introduction: Primary immunodeficiencies (ID) are considered rare diseases and it has been previously described that about 10% of patients referred with recurrent infections present primary or secondary ID.

Objective: We evaluated patients referred to a specialized clinic for immunological investigation in the period of August 1999 to November 2003.

Methods: The records of all the patients were revised and the following data were checked: age, gender, and reason for reference and/or final diagnosis. Patients with previous HIV diagnosis were excluded unless they presented additional manifestations not related to the infection. We performed a comprehensive immunological investigation.

Results: 388 patients (176M: 212F) were evaluated with the following symptomatology: recurrent infections 322/388; infections with uncommon complications 13/388; opportunistic infections 20/388; angioedema and/or urticaria 15/388; other manifestations 17/388 and relatives of ID patients 13/388. The recurrent infections were: respiratory infections, pyodermitis, candidiasis, Herpes virus, Mycobacteriosis and others (CMV, EBV, Paracoccidioidomycosis and Cryptococcosis). 117 out of the 388 patients proved to have a well-defined primary ID. The following primary ID were diagnosed: Common variable ID 25/117; Chronic Mucocutaneous Candidiasis 16/117; IgA deficiency 14/117; idiopathic CD4 lymphopenia 11/117; Hereditary Angioedema 7/117; G6PD deficiency 5/117; Transient hypogammaglobulinemia 5/117; Combined ID 6/117 and several different ID 28/117. Moreover, 50 out of the 388 patients are highly suspected of having a primary ID undefined until now. Additional 51 patients presented other disorders not classified as immunodeficiencies, and 203 patients are still under immunological work up.

Conclusions: About one third of the referred patients had a defined diagnosis of primary ID, a high incidence of these diseases comparing with previous studies. The results suggest the possibility that extensive laboratorial investigation influences the final diagnosis of primary ID.


A6. T CELL ABNORMALITY IN BRAZILIAN PATIENTS WITH COMMON VARIABLE IMMUNODEFICIENCY.

Paolo Ruggero Errante 1; Cristina M. Kokron 1,2, Myrthes Toledo-Barros 1,2, Luiz Vicente Rizzo 1,2

1. Department of Immunology, Institute of Biomedical Sciences, University of São Paulo.

2. LIM-60 – Division of Clinical Immunology and Allergy, University of São Paulo Medical School, Sao Paulo, Brazil.

Objective: Evaluation of activation induced cell death (AICD) on T lymphocytes and other parameters of the immune response in patients with common variable immunodeficiency (CVID).

Methods: Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 33 patients with CVID and 32 normal controls were used to study CD40L expression, lymph proliferation and apoptosis. PBMC were stimulated for different time periods (24, 48, 72 and 96 hours) and analyzed for activation markers (CD25 and CD69) and markers of T-B interaction (CD70). Cytokines (IL-2, IL-4, IL-5 and IFN-) were measured by ELISA in the culture supernatants. All laboratorial tests were applicable in the control group of health volunteer. The results were analyzed using the linear trend in proportion test, ANOVA, Kruskal-Wallis and Mann-Whitney.

Results: Patients with CVID showed an increase in the percentage of CD3/CD4 lymphocytes dying by AICD when compared with the control group (p<0,05), they also showed a decreased expression of CD40L (p<0,0001), CD25, CD69 and CD70 in a kinetic expression assay. A decreased in the synthesis of IL-4 (p<0,05) and IL-5 (p<0,05) was also observed. A decrease in the expression of CD3 (p<0,005), CD3/CD4 (p<0,0001), CD3/CD4/CD45RA (p<0,0001), CD3/CD4/CD45RO (p<0,0001), CD19 (p<0,0001), and the CD3/CD4:CD3/CD8 ratio (p<0,0001) were observed when patients were compared to normal individuals.

Conclusions: The increase in AICD suggest that phenomena is responsible for the decrease in the levels of peripheral blood T and B lymphocytes, as well as the decrease in the expression of CD40L, CD25, CD69 e CD70 and diminished synthesis of Th2-type cytokines, thus leading to the cellular immunity and antibody abnormalities observed in these patients.


A7. CARACTERIZACIÓN CLÍNICA E INMUNOLÓGICA DE PACIENTES CON IDCV

Castaño DM, Orrego JC, Franco JL, Montoya CJ, Olivares MM, Gómez RD, Chinchilla C, Toro JE, López JC, Salgado H, Patiño PJ

Grupo de Inmunodeficiencias Primarias (IDP), Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia. Medellín, Colombia

La inmunodeficiencia común variable (IDCV) es una deficiencia primaria heterogénea caracterizada principalmente por susceptibilidad aumentada a infecciones del tracto respiratorio y gastrointestinal, y bajos niveles de inmunoglobulinas séricas. En la mayoría de los pacientes el defecto genético es desconocido, exceptuando aquellos con delección homocigota en ICOS. En este estudio se describen las características clínicas y la evaluación inmunológica de 9 pacientes diagnosticados con IDCV en el grupo de IDP, como documentación del espectro clínico y los parámetros inmunológicos asociados con este grupo en particular.

En los 9 pacientes, la edad promedio de inicio del síndrome tuvo dos intervalos: 2.5-10 años (55.5%) y de 18-55 años (44%). La edad promedio de diagnóstico fue de 19.5 y 35.43 años para hombres y mujeres, respectivamente. En todos los pacientes se documentaron infecciones recurrentes del tracto respiratorio superior e inferior, y en 8/9 en el tracto gastrointestinal. Cuatro pacientes presentaron infecciones en otros sistemas, mientras que 2 tuvieron manifestaciones de autoinmunidad y granulomas. Todos presentaron niveles séricos de IgG e IgA por debajo de 2 DS para la edad, mientras que en el 77.8% se detectó disminución significativa en los niveles de IgM. El 71.4% de los pacientes presentaron respuestas de hipersensibilidad retadada negativas. En todos la respuesta linfoproliferativa a PHA fue normal, mientras la linfoproliferación a antígenos proteicos lo fue en el 88.9% de los pacientes. Las subpoblaciones de linfocitos fueron normales en el 22% de los pacientes en tanto se detectó en el 77.8% una relación CD4/CD8 invertida. La tasa de supervivencia después del inicio del tratamiento con IVIG permanece en el 100%.


A8. AGAMAGLOBULINEMIA (AG), LEUCOENCEFALITIS MULTIFOCAL (LEM) POR VIRUS JC Y COMPROMISO CELULAR PROGRESIVO.

M. I. Gaillard, R Paz, J Sardañons, R Sánchez, L Bezrodnik. Inmunología Hospital de Niños R. Gutiérrez Bs As. Argentina

Paciente de 13 años, sexo masculino, hijo único de padres no consanguíneos, sin antecedentes familiares. A los 13 meses se le diagnóstica agamaglobulinemia (hipogamaglobulinemia severa, Linfocitos B (LB):0%, clínica compatible (neumonía, bronquitis recurrente y adenitis). Estudio molecular no reveló mutación en el gen de Btk.. A los 4 años, sin compromiso celular (poblaciones linfocitarias y cultivos celulares normales) presentó un cuadro de encefalopatía subaguda progresiva, diagnosticado por biopsia estereotáxica: LEM por virus JC. Recibe tratamiento con Arabinosa-Citosina e IFNa, con buena evolución quedando con secuelas cognitivas y neuromotoras. Sin nuevas complicaciones infecciosas hasta la actualidad.

Laboratorio actual: Linfocitos: 3800 /mm3. Poblaciones celulares: CD3: 89% (3382 /mm3), CD4: 53% (2014 /mm3 ), CD8: 31% (1178 /mm3 ), CD20: 0%, CD56: 6% (228 /mm3 ). Cultivo celular: PHA: 10000 cpm (respuesta ausente), PHA+IL-2: 30000 cpm; PWN: 77000 cpm (normal alto). ConA: 25000 cpm (respuesta baja). OKT3: 14000 cpm (respuesta ausente). OKT3+IL-2: 52000 cpm. Punción aspirado de médula ósea: 0.6% de LB, fenotipicamente compatibles con un arresto madurativo en estadio Pro-B: CD19+, CD34+, Tdt +, CD79acit -, CD79bcit+ CD79bsup-, IgMcit-. Diagnóstico posible: Agamaglobulinemia autosómica recesiva.

Conclusión: Las agamaglobulinemias no presentan compromiso celular. Reportamos un paciente con AG, LEM por virus JC y compromiso celular progresivo.

Comentari: ¿Este compromiso celular es secundario a la LEM o podría esta asociación sugerir una nueva inmunodeficiencia?


A9. FUNCTIONAL ANALISES OF XLA NEUTROPHILS

Francisco R Vallejos, MD Centro de Investigación y Diagnósticos Inmunológicos (CIDI) Santiago, Chile

Background: Neutrophils are the primary cells protecting the host from invasion of infectious agent, but their life span is short. In the lung neutrophils has the ability to rapidly phagocyte pathogens and foreign bodies. Any pathological reduction in the circulating number may be deleterious, increasing the susceptibility to bacteria’s infection. X-linked agammaglobulinemia (XLA) is an inherited disease characterized in its classical form by the almost complete absence of immunoglobulin of all isotypes and a profound reduction of B lymphocytes in the peripheral circulation. The disease has always been considered to be confined to the B cell compartment, however, up to 25 % of patients with XLA have profound neutropenia at the time of diagnosis. Taking all this data we propose to analyze neutrophils from XLA patients by studying functional activity as well their responses to apoptosis or necrosis when stimulated.

Methods: Five male XLA patients were included in this study. Four identified as having a Btk mutation, while the other was diagnosed based on absence of B cells and serum immunoglobulin. All patients had been on regular intravenous immunoglobulin replacement therapy (IVIg) every 4 weeks. Neutrophils isolation was made using 5% dextran, density centrifugation in Ficoll-Hypaque and lysis of contaminating red blood cells (RBC) Over 93% of purity was obtained. 3x105 neutrophils were placed in 24 well plates in 1 ml of RPMI supplemented with Fetal Calf Serum and HEPES and L-glutamine in 5%CO2, 37ºC. Cells were left unstimulated (control) or were stimulated with 10µM of formyl-met-leu-phe (FMLP) and pneumococcal polysaccharide serotype 14 10ng/ml and pneumococcal polysaccharide serotype 18 10ng/ml. Btk expression was determined by western blot analysis using commercial polyclonal anti-Btk. Apoptosis and necrosis analyze was performance measuring Annexin V and Propidium iodide assay and analyze by flow citometry. Microbicidal assay of neutrophil was measure using the lysostaphin biological assay.

Results: Neutrophils from normal health volunteers do not express Btk (as previously were demonstrated. Neutrophils from XLA patients show the same apoptosis/necrosis profile as normal healthy volunteers. Microbicidal assay of neutrophils from XLA patients show the same profile as healthy volunteers.

Conclusions: Btk seem do not have any role in the Neutrophils in normal conditions. We consider that neutropenia seen in XLA patient must be the effect of a severe endotoxemia following severe infection at the time of diagnosis and not a need of XLA gene product in myeloid cells in stress situation.


A10. RAPID SUBCUTANEOUS IMMUNOGLOBULIN INFUSION IN PATIENT WITH PRIMARY ANTIBODY DEFICIENCY: A SAFE AND CHEAPER FORM OF TREATMENT.

Porto Neto A; Wolff NMM; Annes RD; Porto MD.

São Vicente de Paulo University Hospital – UPF, Passo Fundo, RS – Brazil.

A 43-year-old woman, with CIVD was treated with intramuscular gamma globulin injection(SCIG), 100 mg/Kg/week, by subcutaneous infusion. The gamma globulin was mercury free, human immunoglobulin preparation, 165mg/ml (Gamma Globulin – Centeon Pharmaceutical, SP. Brazil). Any systemic adverse reaction between 1 and 24 hours of infusion, local reactions at the infusion sites before infusion and between 1 and 24 hours afterwards, were also recorded and graded as mild, moderate or severe. Blood samples for IgG, IgA, IgM were obtained before the first infusion and after 1 month and every 3 months thereafter. Small portable pump (Anesthesia infusion pump (ANNE), (Abbott Lab., North Chicago, IL) were used for subcutaneous infusion, together with a double 20 ml syringe (BD) and life-shield infusion set (Abbot Lab.) with a 23 butterfly needle (BD). The butterfly needle was inserted into subcutaneous tissue (anterior abdominal wall or thigh at a 60 to 90 angle, penetrating to depth of 1 to 1,5cm) and was secured with tape. Before starting infusion, we checked that the there was no blood return in the tube by aspiration and removal of the syringe from the infusion set. The infusion rate was initially set to 10ml/h by syringe.

The patient received 52 infusions over the course of a year. The IgG before treatment was 52mg/dl. After one month her IgG was 457mg/dl and remained between this level and 650 mg/dl. She never presented any systemic reaction and only mild local reaction, like tenderness 1 or 2 hours after infusion, more frequently in abdominal wall. We did not see redness in local site of infusion and her infections and diarrhea were completely controlled.


A11. SECRETORY IGA FROM POOLED HUMAN COLOSTRUM AND MILK FOR CLINICAL ORAL PASSIVE IMMUNISATION.

Carbonare, C B1; Carbonare, S B2; Arslanian, C1; Carneiro-Sampaio, M M S1

Dep Imunologia – ICB, USP1, Instituto Butantan2, SP, Brasil.

Passive immunization is useful in cases of immunodeficiencies or infection diseases, but usually serum gammaglobulin or hyperimmune sera are administered parenterally, providing systemic immunization, with low protection of mucosal surfaces. Wherein it would be better the oral administration of secretory antibodies, mainly SIgA, which is perfectly adapted to the mucosal environment. Our aim is to obtain a SIgA preparation from pooled human colostrum and milk, maintaining the essential properties of antibodies suitable for clinical oral administration. IgA preparations were obtained from colostrum and milk pools, by salt or alcoholic precipitation and chromatography fractionation. All intermediate and final products were analyzed by SDS-PAGE, protein and IgA determination, ELISA and immunoblotting with bacterial antigens and bacterial adhesion assays to HEp-2 cells. All methods resulted in immunoglobulin preparations with preserved antibody reactivity, high levels of bacterial adhesion inhibition. Salt precipitation gave the best yield and SDS-PAGE showed very few bands of protein contamination. The immunoblotting assays revealed high reactivity against microbial antigens and adhesion assays showed that those preparations inhibited 100% of enteropathogenic Escherichia coli adhesion. Our promising results show the viability of obtaining SIgA from human colostrum and milk suitable for oral use, which in future may be administrated to immunodeficient patients with gastrointestinal manifestations. Supported by FAPESP


A12. HIPOGAMAGLOBULINEMIA ASOCIADA A ALERGIA A LECHE DE VACA EN LACTANTES.

Bezrodnik,L1; Docena,G2; Paz,R1; Canil,ML1; Kohan,M3. Inmunología1 y Alergia3 Hospital de Niños Dr.R.Gutiérrez, Capital Federal. Cátedra de Inmunología2, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata. Argentina.

Introducción: La alergia alimentaria se presenta en el primer año de vida, como manifestación de un trastorno inmune disregulatorio. La más común es por leche de vaca, con niveles de IgE específica aumentados en suero y en la superficie de ciertas células. Los órganos más afectados son intestino, pulmón y piel con diferente grado de compromiso. Eccema agudo generalizado y diarrea severa pueden provocar grave pérdida de proteínas y células.

Material: Dos pacientes menores de 1 año: 1)GL, sexo femenino y 2)GAV, masculino, con hipogamaglobulinemia severa y moderada respectivamente.

Métodos: Inmunoglobulinas G,AyM. Poblaciones Linfocitarias: CD3,CD4,CD8;CD20;CD56. IgE específica contra proteínas de leche bovina Prick test con leche fresca de vaca. Prueba funcional: Anticuerpos anti-toxoide tetánico. Caso 1: Niña de 4 meses, adoptada. Eccema generalizado grave desde los 2 días de vida. Retraso pondoestatural sin infecciones ni diarrea HIV (-), IgG139mg/dl (<2DS) IgA10mg/dl (<2DS) IgM46mg/dl (normal), IgE104UI/ml (VR<1año:2,6-10); CD20:28% (VR:7-23%). IgE específica leche bovina:clase 2, Prick+. Antitoxoide tetánico >20UI/ml (adecuado>0,1)Buena respuesta clínica al tacrolimus tópico y dieta con hidrolizado de caseína. Caso 2: Niño de 10 meses, padres no consanguíneos. Bronquitis obstructiva recidivante; diarrea severa; otitis media aguda. IgG560mg/dl (<1DS) IgA 27 mg/dl e IgM78mg/ml(normales), IgE167UI/ml (elevada); CD20:18%. IgE específica leche bovina:clase2, Prick++. Antitoxoide tetánico 0,4UI/ml. Mejoría clínica con dieta a base de hidrolizado de caseína

Conclusióen: todo paciente menor de 1 año con hipogamaglobulinemia severa o moderada en el que se haya descartado inmunodeficiencia primaria, debe sospecharse con clínica compatible alergia alimentaria.


A13. SALIVARY LYSOZYME LEVELS IN PATIENTS WITH PRIMARY IMMUNODEFICIENCY.

Kmiliauskis MA1; Palmeira P1; Arslanian C1; Costa-Carvalho BT2; Jacob CMA3; Carnide EG3; Carneiro-Sampaio MMS1

Department of Immunology, Universidade de São Paulo;2Departament of Pediatric Immunology, Escola Paulista de Medicina; 3Department of Pediatrics, Instituto da Criança do Hospital das Clínicas, São Paulo, Brazil

Lysozyme acts in the peptidoglican wall of Gram-positive bacteria, causing cell death. It is part of innate immunology and is present in blood, external fluid as well in lysosomal granules of phagocytes. Lysozyme is present in human milk throughout lactation in concentration of 100µg/mL, and unlike other factors, this concentration increases late in lactation. Primary immunodeficiency disorders are a diverse group of illnesses that, as a result of one or more abnormalities of the immune system, increases susceptibility to infection. However little is known about mucosal innate soluble factors contributing in host defense of these patients. Our aim was to investigate lysozyme levels in saliva from 30 primary immunodeficiency patients and 60 healthy controls, paired by age and sex. The "lysoplate" method was utilized. Our results showed that there was no significant difference between lysozyme concentrations in saliva from immunodeficient and healthy controls, comparing age, sex and immunodeficiency groups (means: healthy children: 25,17 ± 11,82m g/mL; healthy adults: 29,5 ± 9,3m g/mL; immunodeficient children: 26,9 ± 9,75m g/mL e immunodeficient adults: 35,0 ± 10,6m g/mL). We conclude that lysozyme levels in immunodeficient patients and healthy controls are equivalent and lysozyme activity can not be consider as a compensatory mechanism for helping in host defense against infectious organisms.


A14. DISGAMAGLOBULINEMIA EN UNA NIÑA POSTERIOR A UN LINFOMA DE BURKITT

1 L. Bezrodnik. 1D. Di Giovanni, 3H. Stinzon, 4 B. Diez, 2 V Preciado 1M. Gaillard. 1 Inmunología y 2 Virología del Htal de Niños R. Gutiérrez; 3 Pediatría Htal Británico; 4Hematología FLENI. Bs. As. Argentina

El Síndrome Linfoproliferativo ligado al X es una inmunodeficiencia combinada que envuelve a linfocitos T y B; debido a una alteración de la respuesta frente al Virus de Epstein-Barr (EBV). El defecto se encuentra en el gen XLP (Xq25). Se ha registrado en mujeres portadoras una respuesta serológica anormal frente al EBV, un defecto parcial de células T y disgamaglobulinemia. No existen datos claros sobre defectos puntuales en niñas con patología asociada al EBV. Presentamos a una niña con Linfoma de Burkitt asociado a EBV e inmunodeficiencia humoral.

Métodos: Dosajes de Inmunoglobulinas y subclases. Poblaciones Linfocitarias: CD3, CD4, CD8, CD20, CD56. Estudios funcionales anticorpóreo: medición de anticuerpos contra antígenos polisacáridos y proteicos. Respuesta ante mitógenos. Funcionalidad NK. PCR para EBV en taco de biopsia y sangre periférica. Serología EBV: VCA IgM e IgG, EBNA.

Caso Clínico: Niña de 6 años, 2da hija de un matrimonio no consanguíneo. Se diagnostica a los 3 años un Linfoma de Burkitt tipo africano (PCR + EBV). A los 6 meses postquimioterapia, presenta Sinusitis y Otitis media aguda recurrente (2 cuadros requirieron hospitalización y tratamiento antibiótico endovenoso)

Laboratorio: IgG 500mg/dl (<2DS) IgM: 67mg/dl, IgA: 70mg/dl. Respuesta Proteica conservada con ausencia de respuesta a polisacáridos. Poblaciones linfocitarias, cultivo celular y funcionalidad NK normal. Serología EBV: VCA IgM negativo, VCA IgG 1/80, EBNA persistentemente negativo, PCR+ en linfocitos por 2 años (actualmente negativa).

Comentario: La enfermedad relacionada con el EBV en mujeres aun no es clara. No sabemos si este cuadro es secundario a la quimioterapia o a un mal manejo del EBV, lo que conduciría a una conducta terapéutica diferente.


A15. SINDROME LINFOPROLIFERATIVO LIGADO AL X (XLP). PRESENTACION DE 2 CASOS PEDIATRICOS.

Galicchio M, Krasovec S*, Zelazko M*, Danielian S*, Coirini M, Oleastro M*.

Servicios de Inmunología y Oncohematología, Hospital de Niños V. J. Vilela, Rosario; *Inmunología, Hospital Nacional de Pediatría J.P. Garrahan, Buenos Aires, Argentina.

El XLP, inmunodeficiencia primaria poco frecuente, se presenta generalmente como mononucleosis infecciosa (MNI) fulminante. Los que sobreviven pueden desarrollar linfomas, hipo/agamaglobulinemia y/o aplasia medular. Mutaciones del gen SAP han sido identificadas en 40-60% de casos; esto permitió definir como XLP a individuos que presentan inicialmente linfomas o hipogamaglobulinemias. El objetivo es presentar dos pacientes con "diagnóstico definitivo" de XLP y diferentes presentaciones clínicas.

Caso 1. Varón que a los 9 meses presenta MNI (fiebre, hepatoesplenomegalia, poliadenopatías, exantema, linfomonocitosis, EBV IgM +). Por antecedente de hermano varón fallecido por MNI se presume XLP y se trata con gamaglobulina endovenosa (GEV) y corticoides con excelente respuesta. A los 20 días presenta fiebre, hepatomegalia, poliadenopatías, convulsiones tónico-clónicas, hipoplasia de médula ósea y LCR con pleocitosis linfocitaria, hiperproteinorraquia y cultivos negativos, falleciendo inmediatamente. El estudio molecular confirma alteración del gen SAP.

Caso 2. Varón que a los 2 años presenta fiebre, exantema, poliadenopatías, hepatomegalia, neutropenia, y linfomonocitosis. Evoluciona con mejoría clínica y normalización hematológica. A los 8 meses se realiza valoración inmunológica debido a infecciones recurrentes: IgG 282, IgA 4 e IgM 50 mg/dl, isohemaglutininas ausentes, CD3 84%, CD4 32%, CD8 52%, CD19 15%. Se asume como Inmunodeficiencia común variable (IDCV) e inicia GEV. Por antecedentes de 1 hermano varón y tío materno fallecidos tempranamente por infecciones bacterianas, se estudia el gen SAP: mutación en exón 2 (R55X). Actualmente tiene 12 años, en excelente estado general en tratamiento con GEV. Conclusiones: En estos casos se confirma la diversidad clínica ya descripta se destaca la evolución fatal (caso1) a pesar de la sospecha e intervención precoces. Se destaca la posibilidad del estudio molecular en nuestro país para confirmación diagnóstica de casos típicos y aquellos con fenotipo de IDCV, para un correcto asesoramiento genético.


A16. ANTIBODY DEFICIENCY WITH NORMAL IMMUNOGLOBULINS LEVELS DOESN’T SEEMS TO BE ASSOCIATED WITH IMMATURE B CELLS NOR CD14 EXPRESSION IN MONOCYTES.

Ferreyra P.1, Costa-Carvalho B.2, Orii N.3 & Carneiro-Sampaio M.1

Dept. Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, 2Dept. Pediatria, Faculdade de Medicina, Universidade Federal de São Paulo, 3Dept de Dermatologia, Faculdade de Medicine, Universidade de São Paulo, Brasil.

The immune response to polysaccharide antigens is described as T-cell independent. These antigens are composed by repetitive epitopes of oligosaccharide and induce activation and proliferation of lymphocytes B by linking to the surface immunoglobulin and cross-linking of them. The second signal is determined by the binding of the complex polysaccharide molecule/C3d fragments to CD21, which is the complement receptor on B cell surface. We evaluated 13 patients (4-13 years) with severely impaired anti-polysacharide antibody response and normal serum immunoglobulin levels. Flow cytometric analysis of peripheral blood revealed, except in one patient, normal levels of CD19+cells. The mean of CD19+CD21+ cells, was equivalent to normal controls and higher than patients with CVI. B CD5+ cells are a subset of B cells found in early ontogeny and they constitute a small fraction of adult B cells. None of our patients had high percentage of CD19+CD5+ cells when compared with healthy controls. It has also been described that HLA-like molecules (CD1 a-d) could present polysaccharide antigens to T cells CD4-CD8- ab + and induce B cell proliferation. No differences were found when our patients were compared with controls. CD14, present on monocytes, is the receptor for LBP (lipopolysaccharide binding protein)-PS. In our patients and healthy controls, more than 96% of monocytes, co-express the receptor CD14 (CD33+CD14+ cells). Only one patient presents low percentages of the CD14 molecule in CD33+ cells when it was compared with the controls. In order to clarify the possible relationships between clinical severity and levels of TNF-a we studied the cytosine in culture supernants. In two patients, accordingly with clinical severity, we found high values when compared with controls


A17. SÍNDROME DE HIPERIGE (SHIGE): HALLAZGOS CLÍNICOS Y DE LABORATORIO EN UNA POBLACIÓN PEDIÁTRICA

Raiden S, Quiroz H, Gaddi E, Cantisano C, Balbaryski J, Giraudi V.

Div. Inmunología Clínica. Hospital General de Niños Dr. P. de Elizalde. Buenos Aires, Argentina.

El SHIgE es una inmunodeficiencia rara caracterizada por infecciones en piel y niveles excesivamente elevados de IgE, relacionada con un perfil de citoquinas predominante Th2. Describimos en este trabajo la experiencia clínica y de laboratorio en 9 niños con diagnóstico posible o probable de SHIgE valorados según el score de Grimbacher (período 2000-2003). Los hallazgos clínicos relevantes encontrados fueron: IgE> 2000 UI/ml 8/9, eczema 8/9, comienzo en menores de 1 año 7/9, eosinofilia 7/9, facies peculiar 6/9, patología pulmonar 4/9, dientes primarios retenidos y paladar alto 3/9, infecciones graves 2/9, escoliosis e hiperelasticidad articular 1/9. Por otro lado, el estudio del perfil Th2 descripto en esta patología se realizó mediante la valoración de IL2 e IL4 por tinción intracelular. El porcentaje de células CD4+/IL2+ de los pacientes con SHIgE estuvo significativamente disminuido en relación a los controles (0,54 ± 0,17 vs. 2,65 ± 0,22 P< 0,01), mientras que el porcentaje de células CD4+/IL4+ se encontró significativamente aumentado en 7 de los 9 pacientes con respecto a los controles (0,93 ± 0,08 vs. 0,48 ± 0,10 P< 0,05). Dado que en el SHIgE los antecedentes infecciosos no se explicarían sólo por un predominio de citoquinas Th2, se analizaron posibles alteraciones fenotípicas en los polimorfonucleares neutrófilos (PMN) y eosinófilos de estos pacientes. Se encontró una franca disminución en la expresión de: A) CD15 en PMN, IMF (intensidad media de fluorescencia): 786 ± 67 vs. 1951 ± 173, (pacientes vs. controles, P< 0,01) y B) CD25 en eosinófilos, IMF: 35 ± 2,7 vs. 55 ± 3,7 (pacientes vs. controles, P< 0,01),

La disrregulación en los niveles de citoquinas y las alteraciones fenotípicas en los polimorfonucleares podrían ser determinantes de algunas de las manifestaciones clínicas descriptas en esta patología.


A18. FRAGILIDAD ÓSEA EN EL SÍNDROME DE HIPERINMUNOGLOBULINEMIA E (SHIE)

Sandoval R, Pablo Patiño, Montoya CJ, Olivares MM, Salgado H, Franco JL

Grupo de Inmunodeficiencias Primarias. Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia. Medellín, Colombia

SHIE se caracteriza por expresión variable de anormalidades inmunológicas (eczema crónico, abscesos en piel, neumonías con neumatoceles, eosinofilia e IgE sérica elevada), y anormalidades no inmunes del tejido conectivo, dentición y sistema esquelético. La incidencia de anormalidades esqueléticas (fracturas recurrentes y escoliosis) varía entre el 43 % - 57 %. Este estudio evaluó la incidencia clínica de fracturas recurrentes y la densidad mineral ósea (DMO) en 8 pacientes con SHIE (puntajes NIH=³ 37 puntos). Se investigó número de fracturas (trauma aparente o trauma mínimo), localización y factores predisponentes y se evaluó DMO por densitometría de absorción de rayos X (DEXA) en hueso trabecular y cortical (columna lumbar y cadera total y antebrazo total, respectivamente) para edad y sexo. En los 8 pacientes (6 hombres y 2 mujeres) la mediana de edad fue de 11 años (4 a 25 años) y 4 tenían historia de ³ 1 fracturas recurrentes de huesos largos (trauma mínimo). De estos, 2 (8 y 11 años) tuvieron densitometrías normales, 1 (25 años) presentó osteoporosis en columna lumbar (T=-2.5/Z=-2.5) y osteopenia en cuello femoral y antebrazo (T=-1.2/Z=-1.1 y T=-3/Z=-2.9, respectivamente); y otro (4 años) presentó densidad mineral ósea disminuída en cadera total y cuello femoral (T=-4 y –4.1, respectivamente). En los otros 4 pacientes sin historia de fracturas recurrentes se detectó disminución de masa ósea en dos (11 y 20 años) afectando columna lumbar (T=-5 y –2.9, respectivamente) y cuello femoral (T=-5 y –2.3, respectivamente). Aunque no es posible concluir osteopenia/osteoporosis en pacientes < 25 años, estos resultados sugieren que al menos un subgrupo de pacientes presenta deficiencia en la adquisición/conservación de la masa ósea. Estas anormalidades deben ser evaluadas oportunamente para prevenir complicaciones asociadas con fracturas.


A19. HYPER-IGE SYNDROME – CASE REPORT

Porto Neto A; Wolff NMM; Porto MD; Annes RD.

São Vicente de Paulo University Hospital - Passo Fundo University, RS, Brazil.

The Hyper-IgE Syndrome is characterized by recurrent infections since early life. The infection susceptibility is due to neutrophil chemotatic defect, without any relation with phagocytosis disturbance nor eosinophils defect. Job´s Syndrome patients present "coarse" facies, growth retardation due to repetitive infections, exceptionally high serum of immunoglobulin E (IgE) and eosinophilia, with absence of atopic disease and parasitism. Moreover, there are both musculoskeletal and dental disturbances (failure of dental exfoliation), as well as precocious craniosynostosis closure. Finally, the prescribed treatment is based on the use of antibiotic and antimycotic drugs or, further, specific therapy when there is infection in activity. In addition to this, it’s common the continued use of chemotatic activators, like antihistamine (Cimetidine) and ascorbic acid, as well as adjuvant therapy without scientific evidence, like IFN-a and Levamisole.

We present the case of a girl, 5 years old, which have a classic symptoms of the Hyper IgE syndrome, such as, recurrent skin infections, recurrent staphylococcal pneumonias, giant pneumatocele, pruritic dermatitis, high serum IgE concentration, normal levels of immunoglobulins, failure of dental exfoliation.


A20. MEDIDA DE TRECS (T CELL EXCISION CIRCLES), POR PCR EN TIEMPO REAL, EN EL SEGUIMIENTO DE PACIENTES SCID CON TRANSPLANTE DE MÉDULA ÓSEA

Yancoski J., Danielian S., Rossi J., Bernasconi A., Oleastro M., Zelazko M.

Servicio de Inmunología- Hospital de Pediatría Juan P. Garrahan, Buenos Aires, Argentina

En pacientes con inmunodeficiencia combinada severa (SCID) la función inmune puede ser restaurada por medio de un transplante de médula ósea (TMO). Para el seguimiento de la reconstitución inmune postransplante (PT) existen estudios controvertidos respecto a la utilización de células naive CD4+CD45RA+ (CD4RA) como marcador de recientes emigrantes tímicos (RET).

Los rearreglos de los genes del receptor T en el timo producen la escisión de fragmentos de ADN circular extracromosomal llamados TRECs cuya cuantificación ha sido recientemente utilizada como medida de la capacidad timopoyética.

En este trabajo medimos, por PCR en tiempo real, el contenido de TRECs en 64 muestras de 8 pacientes SCID con TMO haploidéntico.

Los pacientes estudiados mostraron ausencia de TRECs en el período pre TMO y aparición de los mismos a partir de los 100 días postransplante (PT).El seguimiento fue realizado hasta 300 días PT donde se observaron los valores máximos (mediana en TRECs/105 linfocitos T (LT): 3290, rango 546-5345 ; mediana en TRECs/ml sangre periférica 33560, rango 5124-37820).

Se observa una correlación altamente significativa (P<0.0001, r Spearman >0.5) entre el N° CD4RA y los valores de TRECs expresados en dos unidades N°TRECs/105 LT y N°TRECs/ml SP. El uso de ambas unidades permitiría distinguir la división celular periférica y la producción tímica respectivamente.

Debido a la alta especificidad, sensibilidad y reproducibilidad, la medida de TRECs por PCR en tiempo real, resultó ser la metodología de elección para determinar el origen tímico de los LT. Sin embargo, en pacientes SCID transplantados, la ausencia de LT y TRECs en los primeros 100 días PT, la alta correlación entre N°TRECs y CD4RA (no así con el N° total de LT), sugieren que en este caso particular el pool naive estaría enriquecido en RET validando el seguimiento de estos pacientes, durante los primeros 300 días PT, con la medida de CD4RA.


A21. BONE MARROW TRANSPLANTATION (BMT) FOR PRIMARY IMMUNODEFICIENCY (PID) PATIENTS: REPORT OF THREE BRAZILIAN CASES

Moraes Vasconcelos D, Grumach AS, Chuffi Barros N, Almeida Macedo MCM, Mendroni A, Silva, RL, Dulley F, Duarte AJS.

Primary Immunodeficiency Outpatient Unit (ADEE-3003); Laboratório de Investigação em Alergia e Imunologia Clínica e Experimental (LIM 56); BMT Unit of the Division of Hematology of HCFMUSP, Sao Paulo, Brazil

Background: Primary Immunodeficiencies (PID) are considered rare diseases. Some of these patients present more severe disturbances of the immunity that could only be treated by bone marrow transplantation (BMT).

Case reports: We present three PID patients that needed BMT for the correction of the immunologic disturbance. Case 1: LML, 3y 4m, male, caucasian, > 6m progressive hypotonia and gait. From 6 months of age on, multiple bacterial and viral infections, associated with persistent lymphopenia; 2y 8m – Autoimmune hemolytic anemia. We verified T cell lymphopenia and absence of lymphoproliferative responses; normal Igs and C’ quantifications, presence of anti-nuclear antibodies (ANA) and uric acid=0,1 mg/dL. Purine nucleoside phosphorylase (PNP) extremely reduced. No histocompatible donor was identified. Case 2: RSS, 7m, caucasian, born to consanguineous parents, presented delayed umbelical detachment with omphalitis, needing hospitalization; ocular cellulitis by P. aeruginosa developed after 10 days. Complete blood count showed intense leukocytosis, 26.000 to 83.000 cells/mm3, predominantly neutrophils. Absence of CD18 expression in all hematopoietic lineages. No histocompatible donor. Case 3: NFG, female, 9 months of age, non consanguineous parents, vaccinated with BCG after birth; persistent fever after one week with secretion drainage in the immunization scar. No response to treatment was observed and clinical conditions deteriorated. Mycobacterium bovis (BCG strain) was isolated by hepatic biopsy. During hospitalization, she developed septicemia (S. epidermidis) and infection by P. carinii. Phenotyping showed severe T cell lineage lymphopenia, with normal B and NK counts. She had a 3 years old histocompatible brother. We performed a BMT after magnetic selection of CD34+ cells for patients #1 and # 2, with usual conditioning; for the third case, no conditioning was performed.

Results and evolution: There was grafting in the cases #1 and # 3, with rejection of the graft by patient #2. Patient #3 died due to uncontrolled disseminated mycobacteriosis. Patient #1 evolved well until 5 months after BMT, when he developed an Evans syndrome (anti-platelet and RBC Abs), treated with anti CD20 MoAb, steroids and mycophenolate-mofetil, evolving with infectious complications that lead to death after two months of ICU therapy.

Conclusions: There is a restricted experience of BMT for PID in developing countries. The selection of hematopoietic precursors allows BMT even without histocompatible donors.


A22. ASPECTOS CLÍNICOS E INMUNOLÓGICOS EN EL SÍNDROME DE MICRODELECIÓN 22q11.2 (del22q)

Krasovec S, Oleastro M, Ornani A, Obregón G*, Pérez M**, Gallego M*, Zelazko M.

Servicios de Inmunología, *Genética y **Citogenética del Hospital Nacional de Pediatría J. P. Garrahan, Buenos Aires, Argentina.

El síndrome de del22q comprende un grupo heterogéneo de pacientes que pueden presentar grado variable de dismorfismo facial, cardiopatía, hipocalcemia, hipoplasia tímica, anomalías del paladar e inmunodeficiencia. Esta última es predominantemente de células T, siendo en la mayoría de los casos leve y transitoria. ESID/PAGID establecen valores de linfocitos T CD3+ circulantes menores a 1500/mm3 como criterio de compromiso inmunológico. De acuerdo a ello agrupamos a 40 pacientes pediátricos con del 22q determinada por FISH, con el objetivo de describir las manifestaciones clínicas e inmunológicas en cada grupo: grupo I <1500 (n=12); grupo II >1500 y < percentilo (Pc) 25 para edad (n=18); y, grupo III > Pc 25 (n=10).

Resultados: Todos los pacientes presentaron anomalías faciales; cardiopatía el 75% del grupo I, 83% del grupo II y 50% del grupo III; hipocalcemia el 64% del grupo I, 41% del grupo II y 10% del grupo III. El 67% del grupo I y 72% del grupo II presentó infecciones severas y/o respiratorias bajas recurrentes, mientras que no fueron observadas en el grupo III. El 63% del grupo I y sólo 1 paciente del grupo II presentó linfocitos totales circulantes disminuidos. La linfopenia T fue a expensas de CD4 y CD8 en el grupo I, mientras que en el grupo II fue a predominio de CD4. Sólo 2 pacientes del grupo I presentaron proliferaciones linfocitarias disminuidas a PHA. No se registraron deficiencias de Ig G, A y M en ningún caso. Mortalidad: 1/40 por complicaciones posteriores a la cirugía cardíaca.

Conclusiones: Las características faciales se observan en forma constante, no así las cardíacas. No observamos compromiso celular severo ni de la inmunidad humoral. Dada la similitud en las manifestaciones infecciosas entre los grupos I y II, otros factores además de los valores de linfocitos T circulantes influirían en el grado de la susceptibilidad a infecciones.


A23. DEFICIT PARCIAL DEL RECEPTOR 1 DEL INTERFERÓN GAMMA (IFNGR1) EN UN PACIENTE CON MICOBACTERIOSIS HEPATOESPLÉNICA

C.Navarrete*; L. Velozo*; Vega N.**; JLCasanova***

*Hospital Roberto del Rio, Santiago de Chile, ** Hospital Regional de La Serena, Chile, ***INSERM Franci

El déficit parcial del IFNGR1 es una alteración recientemente descrita, se han identificado mutaciones en el dominio extracelular del receptor lo que provoca una disminución del receptor por su ligando. Estos pacientes se caracterizan por una mayor susceptibilidad a infecciones por Mycobacterias y Salmonellas. Los granulomas de estos pacientes están bien constituidos pero serian tardíos y menos eficientes. Presentamos el primer caso de este defecto diagnosticado en Chile aprovechando la red del LAGID con el Laboratorio de Genética Humana de enfermedades infecciosas del Hospital Necker de Paris, Francia.

Paciente actualmente de 2 años de edad con el antecedente de presentar una adenitis catalogada como BCG a los 4 meses de edad que no responde a tratamiento con Isoniacida requiriendo cirugía. La biopsia demuestra adenitis granulomatosa necrotizante supurada compatible con adenitis TBC (PCR positiva para Mycobacterium bovis y/o humano). Evoluciona con mayor compromiso del estado general demostrándose una TBC hepatoesplénica con formación de granulomas e identificación de bacilos ácido alcohol resistentes Ziehl Nielsen positivo. Se inicia tratamiento triasociado con buena respuesta clínica. El estudio de su inmunidad descarta hipogamaglobulinemia y enfermedad granulomatosa crónica. Tiene un PPD de 11mm y estudio de subpoblaciones linfocitarias normales. En Francia se detecta una mutación 187T del IFNGR1, con altos niveles séricos y pobre respuesta a interferón gamma exógeno.

Conclusión: El diagnóstico en forma oportuna de esta alteración genética nos obliga a un control permanente por la posibilidad de recidiva y eventual tratamiento permanente.


A24. INTERFERON-g RECEPTOR 2 (IFNg R2): MOLECULAR LOCALIZATION AND FUNCTIONAL CHARACTERIZATION OF REGIONS REGULATING ACCUMULATION, DISTRIBUTION AND IFNg RESPONSE

Sergio D. Rosenzweig (1,2) and Steven M. Holland (2)

(1) Servicio de Inmunología, Hospital Nacional de Pediatría "J. P. Garrahan", Buenos Aires, Argentina, and (2) Laboratory of Host Defenses, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, NIH, Bethesda, MD

IFg responsiveness regulates immune function ranging from mycobacterial susceptibility to autoimmunity to immune control of tumors. However, the intrinsic regulation of the function of the IFg receptor (IFg R) complex is still largely unknown. The IFNg R is composed of IFNg R1 and IFNg R2; IFNg R1 is constitutively expressed on all nucleated cells, while IFNg R2 membrane display is tightly regulated. We identified a patient with a mutation in the transmembrane domain of IFNg R2 (791delG), leading to autosomal dominant repression of IFNg signaling. This mutant IFNg R2 had a novel subcellular distribution without membrane expression. The finding of a membrane-excluded receptor with a dominant effect focused our attention on the transmembrane and membrane-proximal domains of IFNg R2. To study this domain and the factors leading to control of the IFNg R response, we created a series of labeled IFNg R1 and IFNg R2 molecules, into which we introduced specific mutations. The LI residues at 255-256 control IFNg R2 membrane accumulation and IFNg response: their deletion (255∆2) or alanine substitution (LI255-256AA) leads to plasma membrane overaccumulation and a dominant gain of function for IFNg signaling. In contrast, introduction of a stop immediately before this region (254X) leads to overaccumulation and a robust dominant negative effect. Therefore, by investigation of these natural (791delG) and created (LI255-256) mutants, we have shown that IFNg R2 receptor display is indeed the bottleneck in IFNg R responsiveness. The creation of dominant gain of function IFNg R2 mutants indicates that these pathways can be exploited to enhance host immune response, which may be of value in the treatment of intracellular infections and cancer. However, receptor display is neither necessary nor sufficient for dominant inhibition of IFNg signaling. These novel mutations indicate that further critical cytoplasmic components in the IFNg signaling pathway remain to be identified.


A25. ESTUDIO CLÍNICO Y MOLECULAR DE UNA PACIENTE CON LINFOPENIA IDIOPÁTICA DE LINFOCITOS T Y B E INMUNOGLOBULINAS SÉRICAS NORMALES

Orrego JC, Franco JL, Montoya CJ, Olivares MM, Salgado H, Patiño PJ.

Grupo de Inmunodeficiencias Primarias. Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia. Medellín, Colombia

Los defectos genéticos en la función de los linfocitos (L) conducen a infecciones recurrentes que a menudo reflejan el tipo de inmunidad afectada, siendo las de LT de mayor severidad y compromiso por su singular susceptibilidad a patógenos oportunistas. Se presenta una paciente de 39 años de edad con infecciones inusuales y severas desde la infancia, linfopenia generalizada y niveles normales de inmunoglobulinas séricas (Igs). La historia de infecciones inició con varicela zóster y desarrollo de múltiples verrugas vulgares en piel de extremidades a los 7 años. A los 28 presentó meningitis por C. neoformans y 2 años más tarde TBC miliar e intramedular, con respuesta adecuada a los tratamientos; sin infecciones adicionales desde hace 8 años. Historia familiar irrelevante. La evaluación inmunológica demostró: HIV (-) en varias ocasiones, RHRs consistentemente negativas (cándida y PPD) y respuestas linfoproliferativa a mitógenos y antígenos protéicos bajas. Las subpoblaciones de linfocitos por revelaron linfopenia severa a expensas de LT (CD4+ y CD8+) y LB (CD19+) con LNK CD16+CD56+ normales. Sin embargo, las Igs séricas y la producción de anticuerpos en respuesta a VHB y neumococo fueron normales así como la expresión de HLA-I y HLA-II en mononucleares de sangre periférica (CMNs). La estimulación de CMNs de la paciente con PMA + Ionomicina (Im) reveló que sus LT regulan positivamente la expresión de CD69 (marcador de activación temprana) similar al control; en contraste, la estimulación con anti-CD3 no indujo expresión significativa de CD69 en los LT de la paciente. El estudio histológico de piel más reciente confirmó verrugas vulgares y se aisló ADN de papilomavirus (en caracterización). Se discuten los posibles mecanismos que conducen a la linfopenia combinada en presencia de Igs normales.


A26. EXPRESIÓN DE CD54 Y CD86 EN CÉLULAS MONONUCLEARES DE PACIENTES CON CANDIDIASIS MUCOCUTÁNEA CRÓNICA (CMC)

Pedroza LA, Gómez J, Patiño PJ, Rugeles C, Franco JL

Grupo de inmunodeficiencias primarias, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia. Medellín, Colombia.

La activación antígeno-específica efectiva de linfocitos es mediada por moléculas de superficie coestimuladoras y de adhesión que participan activamente en la formación de la sinapsis inmunológica. CMC se caracteriza por elevada susceptibilidad a infecciones superficiales por C. albicans, y recientemente se demostró en modelos murinos que CD86 y CD54 son críticas en la respuesta eficaz contra C. albicans. Se evaluó la cinética de expresión de CD54 y CD86 en células mononucleares de sangre periférica (CMNs) de pacientes con CMC. CMNs de 3 pacientes y 3 controles sanos se cultivaron en presencia de C. albicans o toxoide tetánico por 6, 24, 72 y 120 h, y se midió expresión de CD54 y CD86 por citometría de flujo. Adicionalmente, en cultivos similares en paralelo se evaluó expresión de CD69 a diferentes tiempos en linfocitos T (CD3+), B (CD19+), y NK (CD16+/CD56+), y monocitos (CD14+), para comprobar activación post-estímulo. Los resultados con ambos antígenos mostraron expresión equivalente de CD86 durante el período del estímulo en pacientes y controles (hasta 120 h), mientras que CD54 (equivalente en pacientes y controles hasta las 24 h) disminuyó significativamente a las 72 h y permaneció baja sólo en los pacientes. CD69 fue equivalente en pacientes y controles en linfocitos B y monocitos hasta las 120 h, mientras que en linfocitos T disminuyó significativamente a las 72 y 120 h sólo en pacientes. La expresion de CD69 en células NK se dificultó por regulacion negativa de CD16 a partir de las 6 h y hasta las 24 h sólo en pacientes; sin embargo, CD69 fue equivalente en ambos grupos cuando se empleó solamente CD56 como marcador de NK (6, 12 y 24 h). Lo anterior sugiere que CD54 es modulada negativamente en respuesta a estímulos antigénicos en pacientes con CMC, lo cual podría afectar las respuestas antígeno-específicas.


A27. CHARACTERIZATION OF P67PHOX401 USING THE COSPHOX CELL SYSTEM

Matute JD,Arias AA, Patiño PJ, Dinauer MC

Primary Immunodeficiency Diseases, University of Antioquia, Medellín, Colombia, and Herman B. Wells Center for Pediatric Research, Indiana University Medical Center, Indianapolis, IN, USA

The NADPH oxidase of phagocytes consists of the subunits p22phox and gp91phox (membrane flavocytochrome b558,), p47phox, p40phox and p67phox (cytosol complex during the resting state), and Rac. These components assemble at the cell membrane after activation to make up the active enzyme that catalyzes superoxide production used as defense against certain microorganisms. Mutations in the genes encoding gp91phox, p22phox, p47phox and p67phox result in variants of chronic granulomatous disease (CGD). Our aim was to evaluate the effects of the expression of a p67phox deletion mutant (p67phox401 associated with CGD), using a non-hematopoietic heterologous cell model for NADPH oxidase (COSphox cell system). Stable COS-7 cell lines previously established to express human cDNAs encoding gp91phox, p22phox and p47phox, or a combination of these were transiently or stably transfected with cDNAs for wild type (wt67phox) or mutant (m67phox) p67phox, RacQ61L, and/or p40phox. Superoxide production in response to PMA or arachidonic acid (AA) was evaluated using a quantitative kinetic assay for superoxide dismutase-inhibitable reduction of cytochrome C or, an isoluminol cheluminiscence assay; protein expression was analyzed by immunoblotting. Our results show that m67phox can be transiently expressed in COS cells and reconstitutes a functional NADPH oxidase in response to both PMA and AA, when compared to wt67phox, despite that m67phox was expressed at lower levels than wt67phox (suggesting some instability of the mutant protein). Expression of p40phox did not affect NADPH oxidase function when expressed simultaneously with wt67phox or m67phox, but m67phox required p47phox for supporting O2- production. In summary, m67phox can support NADPH activation in response to Rac pathway.


A28. PRESENTACIÓN CLÍNICA HETEROGÉNEA EN DEFICIENCIA DE C2 (DC2)

Ginaca A.1, Gomez Schmid R1, Perez N2, Troielli P3. 1Inmunología, Htal de Niños R. Gutiérrez, Bs.As y 2Inmunología Htal Sor M. Ludovica, La Plata. 3 Dermatología Htal de Clínicas, Bs.As. Argentina

La DC2 representa la deficiencia de complemento más frecuente. El 50% cursa con infecciones severas y recurrentes por gérmenes encapsulados, 20- 40% enfermedades autoinmunes o pueden ser asintomáticos.

Objetivo: Presentar la variabilidad de expresión clínica en DC2 y revalorar la utilidad de los ensayos funcionales para complemento.

Métodos: Funcionalidad de vía clásica (CH50, VN:180-280 UH50/ml) y vía alterna (AH50, VN: 7-12 minutos) por ensayos hemolíticos. Cuantificación de C3 (VN: 90-150 mg/dl), C4 (VN: 15-35 mg/dl). C1q (VN: 60-180 mg/l) y C2 (VN: 14-29 mg/l) por IDR. Paciente 1: sexo femenino, sin antecedentes personales ni familiares. Presenta 2 episodios (8 y 11 años) de sepsis y meningitis a meningococo B y neumococo. CH50<50, AH50: 9 minutos, C3: 159, C4: 29, C1q: 155 , C2<1.7 ; IgG, IgA e IgM en el límite inferior para la edad, IgG2 disminuida, respuesta de anticuerpos a antígenos proteicos y polisacáridos serotipo específicos de neumococo normal. Paciente 2: sexo femenino, sin antecedentes personales ni familiares. A los 50 años comienza, en forma progresiva, con caída de cabello, artralgias, fibrosis pulmonar, rash fotosensible, dolor y debilidad muscular compatible con miositis. FAN positivo 1/160 patrón homogéneo; otros autoanticuerpos negativos; anti histonas positivo; C3: 170; C4: 24; CH50<50; AH50: 11; C1q 160 ; C2<1,7. Paciente 3: sexo masculino. A los 9 años presenta fiebre y dolor abdominal recurrente de 2-3 días de evolución que remite espontáneamente, edema de cara, esplenomegalia, anemia y gastritis inespecífica por biopsia. C1 inhibidor cuali y cuantitativo e IgD normal, incremento de IgG, IgM disminuída, CH50<50, AH50: 12, C3: 77, C4:9, C1q: 180, C2<1,7.

Conclusiones: La DC2 puede presentar cuadros clínicos diversos. Debe pensarse a partir del hallazgo de ensayos funcionales alterados.


A29. COMPARISON BETWEEN TWO HEMOLYTIC ASSAYS FOR THE EVALUATION OF CLASSICAL AND ALTERNATIVE PATHWAYS OF COMPLEMENT SYSTEM

Daniela Fernandes Cardoso, Viviana Galimberti Arruk, Denise Tambourgi, Alberto José da Silva Duarte, Dewton de Moraes-Vasconcelos, Anete Sevciovic Grumach

Laboratório de Investigação em Alergia e Imunologia Clínica e Experimental (LIM 56), Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, Brazil

Background: The ability of classical and alternative pathways of the complement system in lysing erythrocytes is used as a functional assay to evaluate the activation of these pathways and reflects the deficiency of a specific protein of the cascade. The CH50 assay measures the capacity of classical pathway in forming the membrane attack complex (MAC) that lyse antibody-coated sheep red blood cells. Conversely AP50 measures the ability the alternative pathway in generating MAC and lysing rabbit red blood cells, which membrane is responsible for the start of this process. The absence of lysis in these assays may indicate the deficiency of a protein of each of these pathways of complement system. Usually, these assays are performed in tubes, and they present several drawbacks, being the delay for the reading of their absorbances the main disadvantage. We therefore propose the standardization of an optional technique performed in 96 wells microtitration plates and the determination of its normality values.

Methods: We evaluated 60 samples by the plate technique and compared with 50 samples previously performed in tubes. The assays can be described as follows: CH50: Serial dilutions of the samples ranging from 1/20 to 1/160 are incubated in 96 wells plates with the hemolytic system (sheep red blood cells sensitized with hemolysin). The standard curve is determined simultaneously. The absorbance is determined at 415 nm.

AP50: Serial dilutions of the samples ranging from 1/10 to 1/160 are incubated in 96 wells plates with rabbit red blood cells. The standard curve is determined simultaneously. The absorbance is determined at 415 nm.

Results: We calculated the means for assays performed in plaque, which were 114 U/mL for CH50 and 26 U/mL for AP50 and 2 standard deviations were calculated. These results were compared with tube assays previously performed in our laboratory. We also calculated the means of tube assays, which were 81 U/mL for CH50 and 56 U/mL for AP50. The analysis of our data showed that the comparison of the results expressed in U/mL evidenced a high numerical difference between both techniques. When these results were converted to percentages and the values compared, we observed that both techniques were equivalent and that the plate technique expressed the results with fidelity.

Conclusion: We can conclude that the plate assay has many advantages when compared to the tube assay, mainly due to the easy and quick performance, allowing the evaluation of 23 samples at a time.


A30. DEFECTO COMPLETO DE RECEPTOR DE IL-12, MANIFESTANDO ADENITIS SUPURADA POR SALMONELLA B CON REMISIÓN COMPLETA POR FACTOR DE TRANSFERENCIA ESPECÍFICO. 1er CASO EN MÉXICO

Renato Berrón, Rafael Santana, Francisco J. Espinosa, Marco A. Yamazaki, Claudia Almendarez, Guadalupe Rosiles y Sara Espinosa. México

Introducción: Dentro de las inmunodeficiencias primarias de fagocitosis, actualmente existe un grupo nuevo por defectos en el eje de INFg /IL-12, descrito por primera vez en 1998. Nosotros describimos en este trabajo, el primer caso reportado en México de un paciente con defecto completo del receptor de IL-12.

Caso Clínico: Masculino 6 años, 3 hermanos muertos a los 2 y 3 años, 1 de ellos tuvo adenitis supurada semejante al paciente. Todos recibieron BCG. Inició padecimiento al año de edad con fiebre intermitente y adenopatías cervicales gigantes, 4 años antes de su ingreso al Instituto Nacional de Pediatría, con pústulas y drenaje purulento de las adenopatías.

Laboratorio: anticuerpos específicos para Salmonella B= 1:320, 000; cultivos de sangre, heces y secreción de adenopatías: positivo Salmonella B; Ziehl Nielsen en orina y secreciones: negativo; biopsia de ganglio cervical: hiperplasia linforeticular. Resto de estudios normales.

Iniciamos tratamiento con antibióticos por 10 días sin respuesta. Se aplicó Factor de Transferencia inespecífico obtenido de un hermano sano con respuesta parcial. Posteriormente se aplicó Factor de Transferencia específico con lo que remitió el cuadro y hasta el momento se encuentra en remisión.

En el 2003 se diagnosticó deficiencia completa de receptor de IL-12 autosómica recesiva, homocigota para la mutación en 179+ 2T>G (corte exón/intrón 15).

Discusión: Dentro de los mecanismos para la eliminación de gérmenes como Salmonella, es fundamental la integridad del eje IN[ g] /IL-12. Se han descrito actualmente defectos a nivel de 5 moléculas participantes en el eje. En una revisión reciente 41 pacientes presentaron infecciones por BCG diseminada, micobacterias atípicas y/o Salmonella no tiphi. Estos pacientes han recibido tratamiento con antibióticos e INg.

En nuestro paciente, ante la sospecha de un defecto de inmunidad celular y la falta de respuesta a los antibióticos, decidimos usar Factor de Transferencia específico para estimular a la misma. Ahora conocemos el defecto exacto, y con los conocimientos actuales sobre defectos moleculares en inmunodeficiencias y efectos del Factor de Transferencia, establecemos la hipótesis de que el Factor induce la síntesis de INg , por una vía diferente a la IL-12, probablemente en el LT a través de CD28.


A31. EFECTO DE LA TERAPIA DE REEMPLAZO CON GAMAGLOBULINA HUMANA INTRAVENOSA EN PACIENTES CON INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS DE ANTICUERPOS

Javier E. Toro, Julio C. Orrego, Margarita Olivares, Rubén D. Gómez, José L. Franco, Pablo J. Patiño.

Grupo de Inmunodeficiencias Primarias, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia

Las inmunodeficiencias primarias de anticuerpos se caracterizan por infecciones recurrentes de tracto respiratorio y gastrointestinal y por disminución de los niveles séricos de inmunoglobulinas. En estos pacientes la terapia de elección es el reemplazo de anticuerpos con gamaglobulina humana intravenosa (IVIG).

Se realizó un estudio retrospectivo de 12 pacientes que cumplían con los criterios diagnósticos del LAGID para agamaglobulinemia ligada al cromosoma X o inmunodeficiencia común variable, y se comparó la frecuencia, duración y gravedad de las infecciones antes y después de iniciar la terapia con IVIG.

La edad media de los pacientes al inicio del estudio fue de 22.3 años, con un promedio de 5.43 años de terapia y 10.5 meses/año con IVIG. La edad promedio de inicio de infecciones fue de 10.7 años. Las infecciones más comunes antes del tratamiento fueron otitis media, amigdalitis, sinusitis, bronconeumonía y giardiasis. En el 33% de las infecciones respiratorias se aisló S. aureus y S. pneumoniae. La concentración promedio de IgG sérica al diagnóstico fue de 132.3 mg/dl y de 605 mg/dl 25 días post tercera aplicación de IVIG. Se encontró que luego de iniciar la terapia de reemplazo regular con IVIG hubo una reducción significativa en el número de infecciones por año (preIVIG = 4.532 DS± 1.983; postIVIG = 1.233 DS± 1.930; P<0.001); y en los días de infección por año (preIVIG = 46.78 DS± 25.28; postIVIG = 4.698 DS± 4.889; P<0.001). También se encontró disminución significativa en el número (P=0.004) y duración (P=0.007) de las hospitalizaciones.

La terapia de reemplazo con IVIG en deficiencias de anticuerpos reduce significativamente la frecuencia, duración y severidad de los procesos infecciosos, así como el número y duración de las hospitalizaciones.


A32. MOLECULAR GENETICS OF PATIENTS WITH CHRONIC GRANULOMATOUS DISEASE IN LATIN AMERICA

Agudelo PM, Prando-Andrade C, López JÁ, Costa Carvalho BT, Quezada A, Cornejo M, and Condino-Neto A.

Rationale: Chronic granulomatous disease (CGD) is a primary immune deficiency characterized by recurrent infections due to defects in phagocyte NAPDH oxidase system. Heterogeneous mutations can affect one of the components of the NADPH oxidase. The X-linked form of CGD is caused by defects in the CYBB gene encoding the gp91-phox protein, and accounts for 60% of CGD cases. Mutations in the NCF-1 gene, which encodes the p47-phox protein, are present in 30% of CGD cases, and is the most common form of autosomal CGD. In this paper, we report on the molecular characterization of two siblings and nine unrelated kindreds from Brazil and Chile, caused by gp91-phox and p47-phox deficiencies.

Methods: Probable CGD diagnosis was established by medical history and the demonstration of a defective respiratory burst activity. The defective NAPDH oxidase components were screened by RT-PCR and the exons with the possible mutation were detected by SSCP of gDNA, followed by gDNA or cDNA sequencing.

Results: The CYBB gene analysis revealed mutations in seven cases. We found an insertion (I419A) and two nonsense substitutions (W28 - Stop and A73 - Stop), all of them resulting in frame shift mutations and the formation of premature stop codons. The first mutation affect the interaction of gp91-phox with the cytosolic components of the NADPH oxidase while the other mutations affect the N-terminal domain of gp91-phox and its interaction with the cell membrane and p22-phox. These three mutations are original in the literature. Additional four distinct splicing defects were found. The 130 G→A or 264 G→ A substitutions in CYBB exon 3 resulted in deletion of this exon in two cases. The 54 G→A or 194 G→A substitutions in CYBB intron 10 resulted in deletion of exon 10 in two cases. The 54 G→A substitution in CYBB intron 10 is also original in the literature. The NCF-1 gene analysis demonstrated a homozygous dinucleotide GT deletion at the beginning of exon 2, in the two siblings and two unrelated cases.

Conclusions: We found four original genotypes leading to CGD. This work shows the importance of determining genotype and phenotype of CGD patients in different populations. In addition to provide appropriate genetic counseling and clinical care, the knowledge about new CGD genotypes bring insight to the structure function map of the human NADPH oxidase system.